Иеронимус Макропулос, личный врач императора Рудольфа Второго, изготовил для стареющего монарха эликсир, продлевающий жизнь и молодость на 300 лет. Но император приказал врачу сначала испытать эликсир на своей дочери Элине. Так Элина Макропулос стала бессмертной. Но по истечении трехсот лет действие средства прекращается и, чтобы продлить жизнь далее, нужно его выпить снова. Однако рецепт эликсира у Элины выманил любовник, барон Фердинанд Прус, и не вернул. И вот на 327 году жизни Элины Макропулос под именем певицы Эмилия Марти вмешивается в борьбу за наследство между своим правнуком Альбертом Грегором и наследником фамилии бароном Ярославом Прусом, пытаясь получить доступ к архивам, хранящимся в поместье Пруса. В результате её интриг сын Пруса Янек кончает жизнь самоубийством. Элину разоблачают и она, рассказав историю своей невероятно долгой жизни, отдаёт рецепт вечной молодости юной возлюбленной Янека Кристине. Кристина же без сожалений сжигает пожелтевший от старости лист бумаги.